Composition de l’équipe
L’équipe est composée de 2 Ingénieurs
PRÉSENTATION
Les principales missions de la plateforme de sérologie sont la mise en œuvre, l’amélioration et le développement de tests sérologiques. Ces techniques jouent un rôle crucial dans le diagnostic des maladies infectieuses en mettant en évidence la réponse immunitaire vis-à-vis des agents pathogènes. Au sein de la plateforme de sérologie de l’IHU, cette recherche d’anticorps s’articule surtout autour de deux approches différentes mais complémentaires, l’immunofluorescence indirecte et les Western Blots, avec comme atouts communs la flexibilité et la fiabilité.
L’objectif de l’immunofluorescence indirecte est principalement de détecter des anticorps de classes IgG, IgM et IgA contre les agents pathogènes à partir d’échantillons sanguins. Elle s’appuie d’abord sur une production de lames de microscopie automatisée et personnalisable afin de tester plusieurs antigènes désirés de manière reproductible. Sa réalisation repose ensuite sur le savoir-faire des membres de notre équipe la pratiquant quotidiennement. La lecture et l’interprétation sont automatisées et informatisées grâce à des outils développés au sein de la plateforme. Un grand nombre de sérums peuvent donc être analysés en parallèle rendant cette technique particulièrement adaptée à des opérations de criblage comme l’épidémiosurveillance et la conduite d’enquêtes épidémiologiques.
Les Western Blots sont utilisés pour la détection des anticorps des 5 classes (IgG, IgM, IgA, IgE et IgD) divers échantillons biologiques tels que le sérum, la salive, les selles,…. Plus adaptés au traitement d’un faible nombre d’échantillons simultanés, ils permettent une analyse plus fine de la réponse immunitaire grâce à la séparation des différents antigènes d’un même pathogène. L’utilisation d’une version automatisée et en capillaires de cette technique sérologique contribue à économiser les échantillons, réduire le temps de manipulation nécessaire et limiter les biais.
EXPERTISE
- La préparation de lames de microscopie avec plusieurs antigènes bactériens par un automate assurant leur reproductibilité.
- Le dépistage et la quantification par immunofluorescence indirecte sont successivement réalisés pour tester la présence d’anticorps spécifiques à un ou plusieurs antigènes dans un sérum, puis estimer la quantité de ces anticorps.
- Des études épidémiologiques peuvent ainsi être effectuées en testant un large panel de sérums par immunofluorescence indirecte contre un ou plusieurs pathogènes déposés sur lames.
- Les Western blots automatisés sont principalement exploités pour la recherche d’anticorps dans des échantillons précieux ou peu courant (salives, extractions de pulpe dentaire, etc.).
ÉQUIPEMENT ET TECHNOLOGIES
AxioScan.Z1 (Zeiss) : microscope à fluorescence automatisé. L’AxioScan.Z1 a pour fonction la lecture et numérisationautomatisées de lames de microscopie à fluorescence. Il peut traiter de 1 à 100 lames en un seul passage sur différentes longueurs d’ondes d’émission/absorption.
Echo 525 (Beckmann-Coulter) : automate de dépôt d’antigènes. L’Echo 525 utilise des ondes acoustiques afin de déposer des volumes précis aux coordonnées désirées d’une surface ciblée. Commercialisé à la base pour le transfert de réactifs biochimiques et génomiques, son usage a été adapté pour le dépôt d’antigènes sur des lames de microscopie. Le positionnement, le nombre et le type de ces dépôts (bactéries, virus, cellules eucaryotes,…) peut ainsi être personnalisé afin de préparer un grand nombre de lames adaptées aux analyses désirées.
Jess (BioTechne) : Western Blots en capillaires automatisés. Les systèmes Jess servent à la réalisation de Western Blots reproductibles en nécessitant moins d’une heure de temps technique. L’usage de capillaires et la sensibilité de l’appareil permettent d’obtenir des résultats fiables tout en économisant les antigènes et anticorps souvent précieux.
L’automatisation des Western Blots permise grâce aux systèmes Jess présente trois principaux avantages :
- Un gain de temps technique: une heure suffit à lancer une analyse pouvant prendre 2 jours en version manuelle,
- Une économie des échantillons: les différentes réactions se déroulant dans des capillaires, les quantités d’antigène(s)/anticorps nécessaires sont de l’ordre de quelques microgrammes,
- Une amélioration des résultats: l’absence d’étapes manuelles permet d’améliorer la reproductibilité des analyses et les données chiffrées issues des signaux mesurés facilitent leur interprétation.
OUTILS INFORMATIQUES
Plusieurs programmes informatiques ont été développés en interne pour améliorer la traçabilité des analyses et le rendu des résultats.
Pour l’exemple, l’un de ces programmes permet d’analyser les images des lames d’immunofluorescence indirecte lues par AxioScan.Z1 afin de mesurer différents paramètres, dont l’intensité de fluorescence, au niveau de chaque antigène pour chaque sérum/anticorps testé. Des rapports et de nouvelles images des lames sont alors générées pour mettre en valeur ces résultats et faciliter leur interprétation.
Ces programmes étant développés au sein de notre plateforme, il est possible de les adapter selon les analyses à réaliser.
RÉALISATIONS
Western Blot par Jess
- Développement d’un protocole pour la recherche d’anticorps anti-SARS-CoV2 par Jess dans les premiers temps de l’épidémie de CoViD-19 :
https://link.springer.com/article/10.1007/s10096-021-04203-8
- Développement d’un protocole pour la recherche d’anticorps anti-poliovirus dans les selles de gorilles par Jess :
SPÉCIFICITÉ
- La plateforme est capable de préparer des lames de microscopie personnaliséesgrâce à la diversité des antigènes compatibles (bactéries, virus, cellules eucaryotes, etc.) et la possibilité de choisir leur position sur la lame. Ces antigènes peuvent être produit par une autre plateforme de l’IHU et/ou être fourni par un commanditaire. Les dépôts sont réalisés par un automate assurant leur reproductibilité.
- La numérisation et l’analyse informatisée des résultats des lames d’immunofluorescence indirecte représentent un gain de temps et de fiabilité lors de leur interprétation.
